T 細胞殺傷 - 細胞和細胞因子分析

T 細胞殺傷

細胞毒性 T 淋巴細胞 (CTL) 是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在感染細胞和惡性細胞的清除中扮演者重要的角色。CTL 是免疫系統(tǒng)的功能性 (CD8+) 細胞亞群，可釋放穿孔素，在靶細胞膜上形成孔洞，顆粒酶通過這些孔洞進入細胞，誘導靶細胞凋亡。

免疫細胞誘導的細胞毒性可通過各種治療藥物誘導（例如，單克隆抗體、BiTE、CAR 和 Truck）。免疫系統(tǒng)被視為對抗癌癥的有力手段，并且在腫瘤免疫學領(lǐng)域已有所成效。研究 T 細胞表型和細胞毒性功能的傳統(tǒng)技術(shù)通常：

需要使用單獨的儀器分開進行細胞因子、細胞毒性和標志物表達的分析
使用耗費人力的間接細胞毒性測定方法，例如鉻釋放實驗
需要人工分析并從多個來源匯總數(shù)據(jù)
工作流程冗長、耗時；需要諸如方案優(yōu)化、固定和反復清洗的步驟

iQue^? 人 T 細胞殺傷分析應(yīng)用，可利用 iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒對靶細胞殺傷、T 細胞表型和活化標志物的表達進行同步、高通量的分析，以及對效應(yīng)蛋白和細胞因子的分泌進行定量。結(jié)合 iQue^? 高通量流式細胞儀的強大功能和集成式 iQue^? ForeCyt^? 軟件的實時數(shù)據(jù)分析，可為您提供簡化的解決方案，改進腫瘤免疫學藥物發(fā)現(xiàn)過程。

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檢測原理

圖 1. iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒的分析原理示意圖。

通過 CD8+ T 細胞的狀態(tài)分析，可檢測活化標志物 CD25 和耗竭標志物 PD-1，還可以使用 2-plex Qbeads，通過夾心法免疫分析，在同一孔中定量分析 2 種效應(yīng)細胞因子（IFNγ 和顆粒酶 B）。您可以同時測定 T 細胞增殖或編碼的靶細胞，但本示意圖中未包含此分析。

關(guān)鍵優(yōu)勢

洞察生物學結(jié)果

在生理相關(guān)的模型中評估 T 細胞殺傷

圖 2.CD3×CD19 雙特異性 T 細胞單鏈抗體 (BiTE) 在 6 天內(nèi)可導致濃度依賴性的細胞殺傷、標志物表達和細胞因子釋放。

將帶有 Incucyte^? Nuclight 綠色標記的 Ramos 細胞（15 K/孔）與 PBMCs（75 K/孔）接種到孔板中，進行共培養(yǎng)。使用 CD3×CD19 BiTE 抗體誘導活化。將細胞破碎，然后用 iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒分析細胞和上清液。(A) 靶細胞的活力在 6 天中呈濃度依賴性降低。(B) T 細胞活化標志物和 (C) 耗竭標志物在 CD8+ 細胞上的表達上升，至第 3 天，然后開始降低。(D) 釋放的 IFNγ 和 (E) 顆粒酶 B 的濃度。

提高分析效率

在細胞和微球混合分析中，同時測定標志物的表達和分泌的細胞因子

圖 3.應(yīng)用 Immunocult CD3/CD28/CD2 活化因子誘導 T 細胞活化、耗竭和殺傷標志物的濃度和時間依賴性變化。

將帶有 Incucyte^? Nuclight 綠色標記的 Ramos 細胞（15 K/孔）與 PBMCs（75 K/孔）接種到孔板中，進行共培養(yǎng)。使用 Immunocult CD3/CD28/CD2 誘導活化，采用的最高濃度等同于建議的刺激濃度（25 μL 每 1e6 個細胞/mL）。將細胞破碎，然后用 iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒分析細胞和上清液。(A) 晚期活化的 T 細胞 (CD25) 在 CD8+ 細胞上的表達。(B) T 細胞耗竭 (PD-1) 在 CD8+ 細胞上的表達。(C) 釋放的 IFNγ 和 (D) 顆粒酶 B 的濃度。

簡化數(shù)據(jù)分析

實時數(shù)據(jù)分析和創(chuàng)新的可視化工具，支持快速生成定量讀數(shù)

圖 4.采用 iQue^? ForeCyt^? 上的預(yù)定義設(shè)門進行 T 細胞亞群的自動表型分析

將來自 3 個不同供體的 PBMCs（120 K/孔）與帶有 Incucyte^?Nuclight 綠色標記的 Ramos 細胞（40 K/孔）共培養(yǎng)，并用數(shù)量遞增的 Dynabead CD3/CD28 進行活化。在第 3 天，使用 iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒進行分析。(A) 重疊圖像展示了陽性（4:1，Dynabead:PBMC）和陰性（無 Dynabead）對照中 CD25 表達的差異。(B) 熱圖顯示了來自每個供體的 PBMC 上 CD25 的表達（響應(yīng) Dynabead）。在較低的 Dynabead 密度下，供體 2 形成表型的敏感性要強于供體 1 和供體 3。(C) 圖中將來自 (B) 圖的數(shù)據(jù)匯總為濃度響應(yīng)曲線。