如何提高關鍵蛋白質樣品的回收率:針頭濾器濾膜、體積和pH值的影響
樣品制備過程中的蛋白質損失是生物學、生物技術和生物制藥領域實現(xiàn)產(chǎn)品可靠定量的障礙。面對這類挑戰(zhàn),我們選擇了四種典型的針頭濾器,并在各種樣品條件下,量化了包含兩種不同抗體在內的四種模型蛋白質的回收率,以滿足眾多生物、生物技術和生物制藥應用的要求。
選擇具有最小蛋白質吸附趨勢的濾膜至關重要,不過吸附不僅取決于膜類型,還受到pH和表面電荷等樣品和蛋白質特性,以及特定處理步驟(包括每單位過濾面積的樣品量)的影響。正因如此,確定合適的條件以顯著降低分析物損失能將是一個復雜的多參數(shù)問題,我們使用的實驗設計(DoE)方法可以提供相關指南,以說明能夠在樣品制備過程中顯著降低分析物損失的條件和膜類型。